|
|
Nové fungální fukosidasy a jejich syntetický potenciál
Glozlová, Michaela ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Michaela Glozlová Vedoucí práce: prof. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Konzultantky: doc. RNDr. Pavla Bojarová, Ph.D., Mgr. Pavlína Nekvasilová Název diplomové práce: Nové fungální fukosidázy a jejich syntetický potenciál Literární rešerše se zabývá α-L-fukosidázami, jejich výskytem, funkcí a použitím v syntéze fukosylovaných sloučenin, které byly taktéž předmětem rešerše, zejména jejich výskyt v lidském těle a účast v patologických stavech. Dále jsou zkoumány oligosacharidy lidského mléka, jejich vliv na zdraví kojence a jejich syntéza, k níž se dají využít právě α-L-fukosidázy. Experimentální část zahrnuje analýzu knihovny vláknitých hub s cílem nalezení zástupce s α-L-fukosidázovou aktivitu vůči pNP-α-L-fukosidu. Na základě hledání v genetických databázích byly vybrány a připraveny rekombinantní fungální α-L-fukosidázy a byla testována možnost jejich produkce v Pichia pastoris a Escherichia coli. Produkované enzymy byly purifikovány iontově-výměnnou chromatografií, charakterizovány a byla zkoumána jejich regioselektivita a syntetický potenciál pro syntézu fukosylovaných oligosacharidů. Klíčová slova: fukosidáza, enzym, oligosacharidy, syntéza, lidské mléko
|
|
|
Nové fungální fukosidasy a jejich syntetický potenciál
Glozlová, Michaela ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Michaela Glozlová Vedoucí práce: prof. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Konzultantky: doc. RNDr. Pavla Bojarová, Ph.D., Mgr. Pavlína Nekvasilová Název diplomové práce: Nové fungální fukosidázy a jejich syntetický potenciál Literární rešerše se zabývá α-L-fukosidázami, jejich výskytem, funkcí a použitím v syntéze fukosylovaných sloučenin, které byly taktéž předmětem rešerše, zejména jejich výskyt v lidském těle a účast v patologických stavech. Dále jsou zkoumány oligosacharidy lidského mléka, jejich vliv na zdraví kojence a jejich syntéza, k níž se dají využít právě α-L-fukosidázy. Experimentální část zahrnuje analýzu knihovny vláknitých hub s cílem nalezení zástupce s α-L-fukosidázovou aktivitu vůči pNP-α-L-fukosidu. Na základě hledání v genetických databázích byly vybrány a připraveny rekombinantní fungální α-L-fukosidázy a byla testována možnost jejich produkce v Pichia pastoris a Escherichia coli. Produkované enzymy byly purifikovány iontově-výměnnou chromatografií, charakterizovány a byla zkoumána jejich regioselektivita a syntetický potenciál pro syntézu fukosylovaných oligosacharidů. Klíčová slova: fukosidáza, enzym, oligosacharidy, syntéza, lidské mléko
|
|
|
Enzymová fukosylace oligosacharidů
Horáčková, Karolína ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
Fukosylované oligosacharidy se přirozeně vyskytují v těle savců, tvoří například antigeny krevních skupin nebo oligosacharidy mateřského mléka. Oligosacharidy mateřského mléka působí jako inhibitory epiteliální buňky trávicího traktu kojenců, čímž zabraňují vzniku průjmových onemocnění Mezi nejhojněji zastoupené oligosacharidy mateřského mléka patří 2' Syntéza fukosylovaných oligosacharidů je výhodná z hlediska suplementace do umělé kojenecké výživy, čímž lze riziko průjmových onemocnění snížit. Syntéza oligosacharidů mateřského mléka přirozeně probíhá v Golgiho aparátu pomocí fukosyltransferas, avšak glykosyltransferasy jsou obecně velmi stereo selektivní a jako donory používají cukerné nukleotidy, které jsou nestabilní a finančně nákladné. V rámci této práce je demonstrována příprava fukosylgalaktosy a 2' fukosyllaktosy pomocí mutantní α patřící do glykosidhydrolas (rodina GH 29), která díky mutacím vykazuje vyšší transglykosylační aktivitu. Rekombinantní enzym byl exprimován v a byla charakterizována jeho enzymová aktivita, pH a teplotní optimum. Jako donor pro enzymovou syntézu byl využit α Preparativně byla provedena pouze příprava 2 ktosy, přítomnost 2' reakční směsi byla potvrzena měřením hmotnostních spekter. Klíčová slova enzymová syntéza; fukosidasa; fukosylace; mateřské mléko; sacharid
|
host ::
RSS.